4-1 多克隆抗體制備服務(wù)流程
| 動(dòng)物免疫（宿主動(dòng)物可提供兔、羊、雞、小鼠） | ||
| 設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案 | 客戶有特殊要求，需提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)要求 | 2-3工作日 |
| 免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 | 分三到四次免疫，Elisa檢測(cè)即時(shí)效價(jià) | 6-12周 |
| 微測(cè)Elisa檢測(cè) | 以免疫原為抗原樣品，保證Elisa檢測(cè)效價(jià)1：10000以上 | 1周 |
| 客戶檢測(cè) | 自行設(shè)計(jì)檢測(cè)方案 | 1周 |
| 合格，抗體及技術(shù)服務(wù)報(bào)告交付客戶；不合格服務(wù)停止 | ||
4-2單克隆抗體制備服務(wù)流程
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第一階段：免疫小鼠
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設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案
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客戶有特殊要求，需提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)要求
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2個(gè)工作日
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免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
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5只6-8周齡BALB/C小鼠，Elisa檢測(cè)即時(shí)效價(jià)
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7-8周
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Elisa檢測(cè)
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以免疫原為抗原樣品，保證Elisa檢測(cè)效價(jià)1:10000以內(nèi)
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1周
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第二階段：?jiǎn)慰寺‰s交瘤細(xì)胞株的建立
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細(xì)胞融合
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取小鼠的脾細(xì)胞與骨髓細(xì)胞融合，篩選陽(yáng)性克隆
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克隆擴(kuò)增和初選
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擴(kuò)增并低溫保存一個(gè)成功融合的產(chǎn)物
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亞克隆
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有限稀釋法亞克隆至行成穩(wěn)定的單克隆融合細(xì)胞株
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抗體鑒定（依據(jù)訂單要求）
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測(cè)定上清抗體亞型、特異性、抗體中和反應(yīng)性及抗體配對(duì)參數(shù)
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腹水制備/轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)
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根據(jù)客戶要求，提供不同種類服務(wù)
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抗體純化
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利用Protein A親和純化
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第三階段：?jiǎn)慰寺‰s交瘤細(xì)胞株的驗(yàn)收
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提供的雜交瘤培養(yǎng)物的腹水（或上清液）與顧客方提供的抗原樣品有特異性結(jié)核，同時(shí)抗抗體抗異性只針對(duì)客戶放提供的抗原樣品做出保證
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第四階段：?jiǎn)慰寺】贵w雜交瘤細(xì)胞株的交付
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2-3株雜交瘤細(xì)胞株和少量腹水（或上清液），需要純化的訂單會(huì)依據(jù)訂單要求提供純化后抗體，并給出相應(yīng)的鑒定報(bào)告（包括單抗的亞型）
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抗原親和純化
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使用抗原偶聯(lián)Sepharose 4B制備抗原親和純化層析柱，僅捕獲針對(duì)抗原的特異性抗體，純化得到的抗體產(chǎn)物純度高到90%以上，特異性強(qiáng)、靈敏度高，能明顯減低背景信噪干擾，是抗體純化中最佳的實(shí)驗(yàn)方法之一 |
1-2周
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Protein A/G純化
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特異性的捕獲樣品中國(guó)的IgG，性價(jià)比較高，特別適用于大規(guī)模樣品的純化 |
1-2周
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飽和硫酸銨沉淀法純化
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分離所有的免疫球蛋白，得率最高，但特異性和靈敏度偏低，僅適用于定性分析 |
1周
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